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TSTL travaux pratiques en microbiologie

TSTL ; travaux pratiques en microbiologie. Activités en microbiologie. Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) par macrométhode en milieu ...




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TSTL ; travaux pratiques en microbiologieActivités en microbiologie
Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) par macrométhode en milieu liquide

PREMIER JOUR

Matériel :
• Culture d'Escherichia coli en bouillon nutritif incubée 18 heures à 37°C. Concentration bactérienne estimée à 108 UFC. mL-1.

• Solution mère d'ampicilline de concentration égale à 200 mðg.mL-1.

Structure de l'ampicilline
Manipulation :
1. Préparation de l'inoculum
Réaliser la dilution de la culture d'Escherichia coli en introduisant 100 mðL de la culture fournie dans 25 mL de bouillon Mueller-Hinton.
La suspension obtenue est appelée "inoculum".Composition du bouillon Mueller-HintonInfusion de viande de boeuf300 cm3Peptones de caséine17,5 gAmidon1,5 g
2. Dilution en série de la solution mère d'ampicilline
( Réaliser une dilution en série de la solution mère d'ampicilline selon le tableau ci-dessous.
( Ajouter dans chaque tube 1 mL de l'inoculum selon le tableau ci-dessous.

Numéro des tubes : 1234567891011Eau physiologique stérile (mL) :10111111111Solution mère d'ampicilline (mL) :011--------Redistribuer du tube précédent (mL) :---11111111*Inoculum (mL) : 11111111111Concentration finale en ampicilline en mðg.mL-1 :
* : rejeter 1 mL dans l'eau de Javel

3. Conditions d'incubation
Les tubes de la gamme doivent être incubés 24 heures à 37°C en atmosphère ordinaire.

4. Réalisation des témoins inoculum
( Réaliser une dilution en série de l'inoculum, de la dilution 10-1 à la dilution 10-4.
( Étaler, sous forme de strie, les dilutions 100, 10-1, 10-2, 10-3 et 10-4 sur deux géloses PCA (Plate Count Agar) pour dénombrement. Les stries sont réalisées à l'anse calibrée de 10 mðL. Doubler les stries pour les dilutions cibles 10-3 et 10-4.
( Incuber 24 heures à 37°C en atmosphère ordinaire.

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Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) par macrométhode en milieu liquide

DEUXIÈME JOUR

Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)
( Bien agiter les tubes avant la lecture.
( Déterminer la CMI.

Définition : la CMI en milieu liquide est définie comme la concentration en antibiotique pour laquelle il n'y a pas de trouble visible.

1.1. L’inoculum correspond à un bouillon de 18h d’Escherichia coli dilué dans du bouillon Mueller-Hinton (100µL dans 25 mL). Justifier la dilution réalisée.
1.2. Résultats obtenus : compléter le tableau ci-dessous.

Numéro des tubes : 1234567891011Concentration finale en
ampicilline en mðg.mL-1 :Aspect des tubes : 











Importance du trouble (-, +, ++)
1.3. Justifier le rôle du tube 1 de la gamme.
1.4. Déterminer la CMI.
1.5. Déterminer la catégorie thérapeutique dans laquelle la souche d'Escherichia coli sera classée vis-à-vis de l'ampicilline. Justifier.

Données :

Antibiotique
(nom commun)SigleClasseConcentration critique inférieureConcentration critique supérieureAmpicillineAMAminopénicilline4 mðg.mL-116 mðg.mL-1




2. Approche expérimentale de la Concentration Minimale Bactéricide (CMB)
Après détermination de la CMI, un prélèvement à l'anse calibrée de 10 mðL a été réalisé dans chacun des tubes ne présentant aucune culture visible. Chaque prélI©ª·¸ÀÐà6 7 ? A







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