L'antibiogramme
Le choix de l'antibiotique est réalisé de manière très empirique dans la plupart
des infections banales débutantes : le médecin prescrit, en fonction de l'examen
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Lantibiogramme
Le but de lantibiogramme
Le choix de lantibiotique est réalisé de manière très empirique dans la plupart des infections banales débutantes : le médecin prescrit, en fonction de lexamen clinique, la molécule dont lefficacité lui paraît la plus probable (antibiothérapie dite probabiliste). Ce nest que dans les infections graves, récidivantes ou les échecs thérapeutiques que lon fait appel au laboratoire qui réalisera une culture et un antibiogramme.
Un antibiogramme permet de tester sur milieu de culture, laction de molécules antibiotiques sur une souche bactérienne.
Il donnera donc des indications sur lefficacité IN VITRO de ces antibiotiques.
Quelques définitions
Deux notions sont à connaître avant de faire un antibiogramme :
La CMI ou Concentration Minimale Inhibitrice. Il sagit de la concentration de lantibiotique la plus faible pour laquelle la croissance bactérienne est inhibée (pas de croissance de la population ; 100% de survivants)
La CMB ou Concentration Minimale Bactéricide. Cest la concentration de lantibiotique la plus faible permettant de détruire 99.99% des bactéries présentes au départ (soit une bactérie survivante sur 10000). Si CMB < 5 CMI lantibiotique est très efficace.
Au contraire si CMB > 10 CMI, on le considère peu efficace.
La mesure de la CMI permet de déterminer si une souche est sensible ou résistante à lantibiotique testé. Pour chaque antibiotique, on a pu mesurer les concentrations sériques obtenues chez le patient (humain) dans le cadre dune posologie normale. on distingue alors :
la souche est dite RESISTANTE : la CMI ne peut être atteinte par un traitement réalisé à laide de cet antibiotique sans être toxique pour lanimal.
la souche est dite SENSIBLE : la CMI peut être atteinte par un traitement usuel réalisé à laide de cet antibiotique .
La souche est dite INTERMEDIARE : la CMI ne peut être atteinte quen augmentant les doses.
Remarque : Dans le cas dune souche intermédiaire, augmenter la posologie nest réalisable en pratique que dans les cas où lantibiotique est peu ou pas toxique, de traitement local (plaie, otite) ou dexcrétion sous forme active dans lorgane infecté (par exemple pour soigner une infection du tractus urinaire si excrétion rénale)
Interaction entre antibiotiques
Outre le fait que certaines molécules inhibent ou au contraire exacerbent leffet des antibiotiques (acide, sucre, thymine, etc
), les différents antibiotiques peuvent interagir entre eux. Trois grands types dinteractions peuvent être définis :
La synergie : chaque antibiotique voit son action augmentée par lautre.
Lantagonisme : les effets des deux antibiotiques se contrarient
Lindifférence : que lon utilise chaque antibiotique séparément ou en association, le résultat est le même.
Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)
Afin de pouvoir conclure sur la sensibilité dune souche à un antibiotique donné, il faut déterminer sa CMI vis à vis de cette molécule. Plusieurs méthodes sont à la disposition du laboratoire. On différencie :
les techniques en milieu liquide (en tube, en microplaque)
la technique en milieu solide gélosé (Etest)
A les méthodes en milieu liquide
Une solution mère dantibiotique est diluée de 2 en 2. Le diluant est le bouillon de Mueller-Hinton. Linoculum est préparé à partir dune culture de 24 heures en milieu liquide
A-1 Macrométhode
Reporter dans une série de tubes stériles 1 mL de chaque dilution de lantibiotique. Ajouter dans tous les tubes le même volume dinnoculum. Incuber 24 heures à la température optimale de la souche à tester. Observer les tubes après incubation : la CMI sera la concentration en antibiotique la plus faible pour laquelle il ny a pas de croissance visible. En fait, elle est comprise entre le tube correspondant à cette définition et le premier tube dans lequel une croissance est observée.
A-2 Microméthode
Des microplaques à fond en U (plaque à microtitration) sont utilisables pour la détermination des CMI. Une plaque 96 puits permet la détermination de la CMI de 8 antibiotiques vis-à-vis de la même souche. Dans les cupules dune même ligne, les dilution de lantibiotique et la souche sont introduit à laide dune pipette automatique. Incuber 24 h à la température optimale de la souche. Observer la plaque est une éventuelle pousse dans chaque cupule (ou un dépôt au fond de la cupule). La CMI correspond a la concentration de la cupule ne présentant pas de croissance.
B La méthode en milieu gélosé
Cest la méthode la plus précise car donnant une valeur vraie de la CMI et non un encadrement de celle-ci. Elle est connue sous le nom commercial de Etest®. Elle est cependant rarement utilisée en routine à cause de son coût élevé.
Une bandelette est imprégnée de quantités croissantes dantibiotiques. Elle est placée sur une gélose pour antibiogramme ensemencée classiquement ; lantibiotique diffuse en formant un gradient important : la zone dinhibition à la forme dune ellipse et la lecture est alors directe sur la bandelette là où celle-ci rencontre la zone dinhibition.
Cependant connaître précisément la CMI dune souche vis-à-vis des antibiotiques nest pas essentiel pour le praticien. En effet, il lui suffit de situer cette valeur par rapport aux deux concentrations critiques. On réalise pour cela lantibiogramme qui permet de positionner la CMI par rapport à CC et Cc.
Lantibiogramme
5-1 Lantibiogramme standard en milieu gélosé : méthode des disques
5-1-1 Principe général
Pour réaliser lantibiogramme par le méthode des disques, la culture bactérienne est ensemencée à la surface dune gélose spécialement étudiée, la gélose de Mueller-Hinton, éventuellement additionnée de sang. Des disques pré-imprégnés dune dose connue dantibiotique sont déposés à la surface de la gélose. Lantibiotique diffuse à partir du disque en créant un gradient de concentration. La détermination du diamètre de la zone dinhibition permet une estimation de la concentration minimale inhibitrice. Les caractères de sensibilité ou de résistance de la souche bactérienne en seront déduits.
5-1-2 Technique
En pratique, on réalise à partir de lisolement (souche pure) un ensemencement en tapis sur le milieu.On dispose ensuite les disques dantibiotiques et on place à lincubateur. Au bout de 24 h, on lit les différents diamètres dinhibition et on peut conclure en comparant ceux-ci aux abaques de lecture.
5-1-3 Interprétation
Les abaques de lecture se présentent sous forme de bandes présentant deux données qui délimite les zones SENSIBLE, INTERMEDIAIRE et RESISTANTE. Un report du diamètre mesuré sur la boîte permet de conclure rapidement.
Exemple : 3 souches bactériennes sont testées vis a vis de lampicilline. On mesure les diamètres dinhibition suivants : souche A 8 mm, souche B 25 mm et souche C 15 mm
La souche A est donc RESISTANTE, la souche B SENSIBLE et la souche C est déclarée INTERMEDIAIRE.
5.2 Antibiogramme en milieu liquide
Comme il existe des galeries didentifications miniatures, il existe une galerie antibiogramme. Chaque antibiotique est testé à deux concentrations différentes (délimitant les zones « sensible » et « résistant ») en milieu liquide.
5.3 Transposition pour le praticien
En se souvenant que les concentrations utilisées pour lire lantibiogramme sont les concentrations sériques obtenues chez lhumain en bonne santé après injection parentérale de la dose appropriée, les messages découlant des résultats de lantibiogramme pour le praticien sont :
souche résistante : la probabilité dobtenir une concentration suffisamment élevée in vivo pour contrer la bactérie est nulle ;
souche sensible : la probabilité dobtenir une concentration suffisamment élevé in vivo pour contrer la bactérie est excellente (cela ne signifie pas que lanimal guérira doffice, car un ensemble dautres paramètres interviennent) ;
souche intermédiaire : la probabilité dobtenir une concentration suffisamment élevée pour contrer la bactérie est faible si on ne peut augmenter de manière significative la dose administrée.
B 25 mm C 15mm A 8 mm
Sensible Int. Resistante
Contrôle Dilutions
